結構和安裝
結構:
月旭公司生產的液相色譜柱柱管材質均為316L不銹鋼,兩端結構*一致,其結構如圖一。注意:如無必要請不要自行拆卸除兩端塑料塞頭以外的任何組件。
安裝:
1. 從包裝盒中取出色譜柱,用手輕輕旋出兩端的塑料塞頭,如圖二所示;
2. 仔細觀察管路的洗脫液流向,放好色譜柱的位置,使貼在色譜柱柱體的身份標牌上的流向向標與管路流向相同;
3. 用手將“連接管路的不銹鋼接頭”旋入色譜柱兩端,確認在色譜儀正常運行的條件下不會有液體從連接處流出。
色譜柱維護
液相色譜柱的使用和維護方法的不同會對其分離效率和使用壽命產生很大的影響,以下是色譜柱維護的一些常用方法。
色譜柱使用前注意事項:
月旭公司色譜柱的存儲液,如無特殊說明均與質量檢測報告中所述的流動相相同,對于C18固定相采用的是甲醇和水為檢測流動相,若要使用含鹽濃度較高的流動相,使用前請用超純水或甲醇含量相對較低的甲醇-水頂替掉原來的評價流動相,否則會對色譜柱造成極大的傷害,將會明顯地減少色譜柱的使用壽命。
保持樣品和流動相的潔凈:
由于懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會堵塞色譜柱兩端的篩板,因此在進行色譜分離前,應保證樣品和所用的流動相具有較高的潔凈度。樣品在進樣前應對其進行簡單的針筒過濾;流動相的純度至少應該達到分析純,推薦使用色譜純的試劑。解決此類問題的辦法是在色譜柱的進樣端使用保護柱。
樣品的pH值應在色譜柱允許范圍內:
以硅膠為基質的鍵合相填料液相色譜柱,通常的pH值適用范圍為1.5~10.0。因此,在對樣品進行分離前必須對流動相樣品的pH值進行測試,確保流動相的pH值應在色譜柱允許范圍內,不至于造成基質的流失和塌陷。當必須要在pH值適用范圍的邊界(特別是pH值在8.0~10.0時)條件下使用液相色譜柱時,每次使用結束后應立即用適合于色譜柱保存并與所使用的流動相互溶的溶劑淋洗,并*置換掉原來所使用的流動相。
色譜柱的保存
短時間保存:
如果使用時間間隔不超過四天,則色譜柱無需特別的維護,只需根據zui后一次測試使用的流動相或樣品的性質,在使用后用純甲醇、純水或甲醇與水的混合溶液進行淋洗,直至基線走平約半小時即可。
長期保存:
如色譜柱長時間不用,則將其從HPLC儀中取下保存,取下前用合適的溶劑淋洗,洗去不適于保存色譜柱的洗脫液,反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質,然后用塑料塞頭將其塞緊,色譜柱內*干燥。
色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法
液相色譜柱在使用過程中zui容易碰到的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢地增加,通常這屬于正常現象,但柱壓在使用過程中突然升高則可能存在如下幾點原因:
色譜柱頭中過濾篩板被污染:
用含甲醇或乙腈相對較多的流動相長時間沖洗,直到基線穩定。色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其它有機溶劑形成結晶析出:用水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解,并被沖洗出色譜柱再換用含高濃度甲醇或其它有機溶劑的流動相。
流動相pH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解:
如果是因為pH值控制不當而引起固定相的缺失和塌陷,通常很難使色譜柱恢復,要解決此類問題只有更換新的色譜柱。