今天給各位小伙伴們講講該如何有效的提高理論塔板數。理論塔板數也稱為柱效,是色譜分析中的一個重要參數。各位小伙伴經常會看到藥典中規定理論塔板數不低于某一個數值,因為一旦色譜柱理論塔板數低于該數值,就會出現分離度或者拖尾因子達不到要求的情況,所以理論塔板數是我們衡量色譜柱是否還能用于該項目的一個很重要的參考依據。
理論塔板數是色譜柱性能的主要參數,是表示色譜柱對樣品的分離能力或是分離效率(簡稱柱效),常用“N”表示。通常N值越大,柱效越高,分離能力越強,分離效果就越好。
如果色譜峰形對稱并符合正態分布,N可近似表示為:
N取決于色譜柱固定相(填料)的種類、性質(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、柱內徑、流動相的種類、流速及測定柱效所用物質的性質。
理論塔板數可以定量柱效率,計算公式如下:
N的大小主要和色譜峰中的兩個因數有直接關系,一是保留時間(t單位秒(s)),二是色譜峰寬(w單位厘米(cm)),要想提高色譜峰的分離效果,增加理論塔板數,我們只要從這兩個方面做起就足夠。
延長樣品保留時間方法很多:
1.選擇更長的色譜柱;
2.降低色譜柱溫度;
3.減小流速(這個盡量不要變,因為流速減小,色譜峰寬也會變寬,同時檢測靈敏度也會降低,這樣可能會得不償失);
4.適當降低流動相中有機相的含量(主要針對反相色譜)。
減小色譜峰寬的方法也有很多:
1.減小進樣量;
2.減小進樣器到檢測池之間管路的死體積,尤其是縮短連接管路;
3.采用超高效液相色譜時,采用縮短保留時間的方法也能減小色譜峰寬(這樣可能對增加理論塔板數并無幫助)。